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CAR-T细胞全面解决方案

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      CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T-Cell immune therapy)全称 嵌合抗原受体T细胞免疫疗法,原理是将病人体内取得的T细胞,用基因工程方法经激活、转染、修饰、扩增后,重新注射到病人体内,通过激发人体自身的免疫系统来消灭肿瘤。

 


| CAR-T制备过程 |
 
| T细胞分选 |
 

将外周血处理成PBMC —— 磁珠标记T细胞 —— 上柱分选 —— 洗脱目的细胞
 
用途 货号 产品名称 规格
  科研级别磁珠 130-050-101 CD3 MicroBeads, human 2mL
130-045-101 CD4 MicroBeads, human 2mL
130-045-201 CD8 MicroBeads, human 2mL
  GMP级别磁珠 130-017-601 CliniMACS CD3 MicroBeads 7.5mL
130-030-401 CliniMACS CD4 MicroBeads 7.5mL
130-030-801 CliniMACS CD8 MicroBeads 7.5mL
 
 

| T细胞活化、扩增 |
               T细胞活化第一信号:TCR-CD3 识别MHC抗原复合物,从而激活下游的信号通路。
T细胞活化第二信号:第一信号不足以激活T细胞,APC表 面共刺激分子(如B7)和T细胞表面相应受体(如CD28)结合,向T细胞提供第二活化信号。

 

 

用途 货号 产品名称 规格
方法一:可溶CD3、CD28抗体;
说明: C:\Users\ADMINI~1\AppData\Local\Temp\1558576351(1).png
单独使用可溶CD3、CD28抗体刺激T细胞,需要提前包板子
170-076-124 MACS GMP CD3 pure 0.2mg 0.2 mg in 1 mL
170-076-117 MACS GMP CD28 Pure 0.5 mg in 1 mL
170-076-116 MACS GMP CD3 Pure 1 mg in 1 mL
 130-093-387 CD3 pure functional grade, human 100 μg in 1 mL
130-093-375 CD28 pure functional grade, human 100 μg in 1 mL
方案二:微米级别磁珠刺激

单独使用CD3、CD28可溶性抗体刺激T细胞
130-091-441 T Cell Activation/Expansion kit, human Kit
130-093-627 T Cell Activation/Expansion Kit, mouse Kit
方案三:纳米级别磁珠刺激

nm级别的磁珠上包被了CD3&CD28抗体,高效刺激T细胞活化
130-111-160 T Cell TransAct Kit
170-076-156 MACS GMP T Cell TransAct Kit
130-109-104 TransAct T Cell Reagent-Large Scate,human   Kit
 
 
 
| CAR-T产品质控 |

1、细胞活力
 
 
  在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比即细胞活力。死细胞自发荧光很高,会造成假阳性,使实验充满未知数。

左图:只研究活细胞,阳性细胞比例为61%;右图:没有区分细胞死活,阳性细胞比例为40%,区分细胞死活很明显的影响实验结果。


 
产品编号 名称 规格
562247 BD Horizon™ Fixable Viability Stain 450 0.1 mg
564406 BD Horizon™ Fixable Viability Stain 510 100 µg
564407 BD Horizon™ Fixable Viability Stain 520 150 µg
564995 BD Horizon™ Fixable Viability Stain 570 150 µg
564996 BD Horizon™ Fixable Viability Stain 620 100 µg
564405 BD Horizon™ Fixable Viability Stain 660 100 µg
564997 BD Horizon™ Fixable Viability Stain 700 100 µg
565388 BD Horizon™ Fixable Viability Stain 780 200 µg
564907 BD Pharmingen™ DAPI Solution 1 mg
559925 BD Pharmingen™ 7-AAD 2 mL
556463 BD Pharmingen™ Propidium Iodide Staining Solution 2 mL
 
2、细胞凋亡检测之细胞凋亡之PS外翻的检测

Annexin V是一种Ca2+依赖的磷脂结合蛋白,对PS有高度的亲和性。可在Annexin V上偶联荧光素检测凋亡早期发生的PS外翻。由于死亡的细胞膜通透性增加,可用膜不通透性核酸染料结合DNA,区分死细胞。
产品编号 名称 规格
556547 BD Pharmingen™ FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I -
559763 BD Pharmingen™ PE Annexin V Apoptosis Detection Kit I -
550911 BD Pharmingen™ Annexin V-FITC Fluorescence Microscopy Kit 25 Slides
550474 BD Pharmingen™ APC Annexin V 100 Tests
556420 BD Pharmingen™ FITC Annexin V 100 Tests
556454 BD Pharmingen™ Annexin V Binding Buffer, 10X concentrate 50 mL
556463 BD Pharmingen™ Propidium Iodide Staining Solution 2 mL
559925 BD Pharmingen™ 7-AAD 2 mL
561527 BD™ Accutase™ Cell Detachment Solution 100 mL
 
3、细胞增殖能力
处于周期的细胞核(G1,S,G2,M细胞周期阶段)中表达的Ki-67抗原。在G0期不表达,无法检测到。在细胞周期的间期期间,它与核仁成分相关,并且它在M期的染色体表面。

产品编号 名称 规格
559619 BD Pharmingen™ FITC BrdU Flow Kit 50 Tests
552598 BD Pharmingen™ APC BrdU Flow Kit 50 Tests
562158 BD Horizon™ Violet Proliferation Dye 450 1 mg
565082 BD Horizon™ CFSE 1 mg
 
4、T细胞表型分型检测

5、CRS细胞因子风暴检测

CAR-T治疗骨髓源肿瘤最显著的毒性是CRS。高度增殖的T细胞能引起CRS,表现为高热 和肌痛,不稳定的低血压和呼吸衰竭。从CRS观察中发现一个关键的点,除了预期的效应细胞因子INF-γ外,IL-6在CART治疗的细胞指数级增殖期间也会迅速提升。CRS可能直接 与另一个毒性相关联,即巨噬细胞活化综合征。
 
产品编号 名称 规格
551809 Human Th1/Th2 Cytokine Kit II  (RUO) 80 Tests
560484 Human Th1/Th2/Th17 Kit  (RUO) 80 Tests
 
 观看相关流式课堂请点击链接:Car-T细胞治疗流式解决方案 
 

 

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